Langkah-Langkah Pelaksanaan PCR

Pelaksanaan teknik PCR terdiri dari beberapa langkah berurutan yang harus dilakukan dengan cermat untuk mendapatkan hasil amplifikasi DNA yang optimal. Setiap tahap memiliki tujuan dan kondisi suhu yang berbeda-beda, memerlukan ketelitian dalam pengaturan.

Persiapan Campuran Reaksi

Langkah pertama adalah menyiapkan campuran reaksi yang terdiri atas DNA template, primer, dNTP, buffer, dan Taq polymerase. Semua bahan harus dicampur dalam tabung khusus PCR dalam kondisi steril untuk mencegah kontaminasi.

Proses Siklus Termal

Campuran reaksi kemudian dimasukkan ke dalam thermocycler yang akan menjalankan siklus suhu PCR: denaturasi (94–98°C), anilasi (50–65°C), dan ekstensi (72°C). Siklus ini diulang sebanyak 25–40 kali sesuai kebutuhan.

Analisis Produk PCR

Setelah PCR selesai, hasil amplifikasi DNA biasanya dianalisis menggunakan elektroforesis gel, agar dapat mengidentifikasi ukuran dan jumlah produk DNA yang dihasilkan.